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      實時熒光定量PCR實驗

      實時熒光定量PCR實驗

      簡要描述:
      實時熒光定量PCR實驗 (Quantitative Real-time PCR)是一種在DNA擴增反應中,以熒光化學物質測每次聚合酶鏈式反應(PCR)循環后產物總量的方法。通過內參或者外參法對待測樣品中的特定DNA序列進行定量分析的方法。

      更新時間:2024-05-07

      訪問量:871

      廠商性質:其他

      所謂實時熒光定量PCR技術,是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程,后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
      檢測方法
      1.SYBRGreenⅠ法:
      在PCR反應體系中,加入過量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料特異性地摻入DNA雙鏈后,發射熒光信號,而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發射任何熒光信號,從而保證熒光信號的增加與PCR產物的增加*同步。
      SYBR定量PCR擴增熒光曲線圖
      PCR產物熔解曲線圖(單一峰圖表明PCR擴增產物的單一性)
      2.TaqMan探針法:
      探針完整時,報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收;PCR擴增時,Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監測系統可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現了熒光信號的累積與PCR產物的形成*同步。
      服務流程
      1.客戶認真寫好訂單,提供待檢基因相關信息;
      2.簽訂技術服務合同,支付預付款(30-50%);
      3.設計合成定量PCR引物(或客戶提供文獻引物委托本公司合成);
      4.DNA/RNA的抽提、定量、RNA反轉錄;
      5.PCR預實驗,主要檢測引物的特異性和擴增效率;
      6.正式定量實驗:對所有樣品上機檢測;
      7.實驗結果和數據分析,形成報告。

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